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甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料，属于醌亚胺染料类，这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色，甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用，组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色，甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类，帮助发色团对组织产生染色力，使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色，另外肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%，硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。

• 针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 肥大细胞染色
  
  • 二甲苯或脱蜡透明液脱蜡至蒸馏水。
    
  • 根据切片厚度和组织的不同，浸染于Toluidine Blue O Stain (1%，硼酸盐法)5～30min。
    
  • 蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3～5min。
    
  • (可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。
    
  • 快速95%和无水乙醇脱水，二甲苯或脱蜡透明液透明，封固。
    
  • 染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。
• 软骨染色
  
  • 石蜡切片入二甲苯或脱蜡透明液脱蜡2次，每次15min。
    
  • 系列乙醇各1min，自来水洗2min。
    
  • 入Toluidine Blue O Stain(1%，硼酸盐法)浸染10～15min。
    
  • 自来水洗2min，滤纸吸干水分。
    
  • 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。
    
  • 逐级乙醇脱水。
    
  • 二甲苯或脱蜡透明液透明，中性树胶封固。
    
  • 染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。
• 细胞涂片染色
  
  • 用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液，一般要求稀释到0.1%即可。
    
  • 细胞涂片后立即放入95%的乙醇中固定15s，取出放在纸巾上。
    
  • 滴加1～2滴稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。
    
  • 10～15s后将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去，无需干燥，直接镜检。
    
  • 染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。
• 原位杂交染色
  
  • 用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:100。
    
  • 玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。
    
  • 在蒸馏水或去离子水浸泡数次。
    
  • 按需求进行压片固定。